禽流感(4)

　　高致病力禽流感的肉眼病变包括心肌坏死，坏死的白色心肌纤维与正常的粉红色心肌纤维红白相间，胰腺有黄白色坏死斑点，腺胃乳头、腺胃与肌胃交界处、腺胃与食道交界处、肌胃角质膜下、十二指肠黏膜出血，喉气管黏膜充血、出血，以上病变均为敏感鸡感染高致病力禽流感病毒后比较恒定的病变。有些病例还可见头颈部、腿部皮下胶样浸润，肝有黄白色坏死点，其余器官组织则多呈出血性病变。
　　显微镜下，其病理组织学病变不尽相同，较常见的为心肌炎，心肌纤维坏死，胰腺炎，腺泡细胞坏死，肝、脾、肾、心肌充血、水肿、出血，脑血管周围形成淋巴细胞血管套，脑组织坏死，神经胶质细胞增生等。 对高致病力禽流感，根据病鸡已有较高的鸡新城疫抗体而又出现典型的腺胃乳头、肌胃角质膜下出血的病变，以及心肌、胰腺坏死等，鹅和鸭的头肿、眼的血样渗出物和典型的神经症状等可作出初步诊断。在已做过禽流感免疫接种的禽群，由于症状和病变不典型，仅凭症状和病变则较难作出初步诊断。
　　确诊必须做病毒的分离与鉴定，可选取病死禽的气管和支气管、心、肝、脾、胰、脑，以及直肠、泄殖腔和喉气管棉拭子等作为分离病毒的病料用。
　　将病料按1：5比例加入生理盐水，制成匀浆，离心取上清液，加入庆大霉素、制霉菌素等抗菌药物灭菌或用过滤器除菌，经尿囊腔接种SPF鸡胚或非免疫鸡胚，每胚0.2ml。置37℃温箱中培养，24h前死亡的鸡胚废弃，24h后死亡的鸡胚经冷冻后取尿囊液待检，对第5d尚未死亡的鸡胚，也作冷冻处理后收取尿囊液。收取的尿囊液，一部分作HA检测，另一部分作下一代鸡胚盲传，如连续盲传2～3代HA仍呈阴性即可放弃。
　　对已收获的鸡胚尿囊液，可检测对鸡红细胞的凝集效价（HA），如HA呈阳性反应，则分别用禽流感抗血清、新城疫抗血清、减蛋综合征抗血清对被分离的病毒作HI检验，如被分离病毒的HA活性不能被新城疫抗血清、减蛋综合征抗血清所抑制，但能被禽流感阳性血清抑制，则证实分离的病毒为禽流感病毒。
　　还可以用琼脂扩散试验等对分离病毒作进一步鉴定。由于A型流感病毒有共同的核衣壳和基质抗原，可用被感染鸡胚的尿囊液或尿囊膜研磨匀浆，反复冻融后取上清液作抗原，与已知A型流感抗血清作琼脂扩散试验，如为阳性，则进一步证实被分离病毒为A型流感病毒。然后，可分别用已知的抗H1～H15亚型血凝素的抗血清以及抗N1～N9亚型神经氨酸酶抗血清与已知病毒做微量抑制试验，以确定被分离病毒的HA与NA的亚型。
对流感病毒致病性的鉴定，目前国际上已认可的方法有：
　　（一）将感染病毒的鸡胚尿囊液作10—1稀释后，经静脉接种8只4～8周龄的敏感鸡，每只0.2ml。在接种后10d内，死亡数量在6只或6只以上时，该病毒为高致病力禽流感病毒。
　　（二）被分离的病毒致死1～5只鸡，但不是H5或H7亚型的病毒，则将病毒接种于细胞上，如病毒在缺乏胰蛋白酶时不能在细胞上生长，不能形成细胞病变，则该病毒为非高致病力禽流感病毒。
　　（三）被分离的病毒能致死1～5只鸡，而且是H5或H7亚型，则如果病毒能在缺乏胰蛋白酶的细胞上生长，或其血凝素多肽经氨基酸序列分析，与高致病力禽流感病毒的序列相似，则被分离的病毒也被认为是高致病力禽流感病毒。
　　除此之外，有些国家以静脉接种指数（IVPI）大于1.2，或仅凭H5或H7亚型病毒血凝素多肽氨基酸序列与高致病力禽流感病毒相似为标准，而将被分离病毒判为高致病力禽流感病毒。
　　在血清学检测方法上，琼脂扩散试验可检测A型流感病毒的共同抗原，如被检血清与已知AI沉淀抗原呈阳性反应，即可判定禽群受禽流感感染，但它不能分辨是新近的感染还是过往的感染，也不能分辨抗体是野毒感染还是接种禽流感疫苗引起的。但在没有接种过禽流感疫苗的地区，琼扩试验在流行病学的调查方面仍具有简便、特异性强的优点，若在广泛接种过疫苗的地区，则意义不大。血凝和血凝抑制试验在对新分离病毒的鉴定，尤其是HA亚型鉴定方面有重要意义，但由于流感病毒的HA亚型多，所以一般不用于对疾病的诊断上，而在已接种禽流感疫苗的地区，HI试验则可用于对免疫效果的监测上。