蛋种鸡曲霉菌病的诊断

从北京某原种鸡场孵出的父母代种鸡分别被3个不同的种鸡场购买，共计20000只。在第4周时出现顽固性呼吸困难、采食量下降，6 000只鸡每天平均死亡10只；7～8周之后，死亡率增加，平均每天死亡20只，一直持续到110天左右。在70～80天左右大群采食量不变，出现顽固性腹泻，有的病鸡伸颈、张口呈腹式呼吸，还有的病鸡面部水肿，产蛋高峰期，产蛋率仅为77.4%。取临床发病的种鸡共20只进行剖检，发现在7～8周时，有16只种鸡的肺脏出现菜花样病变结节，气囊表面有大量的干酪样物质，腺胃肿胀，腺胃乳头有部分出血点，脾脏肿大；后期肠道出血，脾脏、肾脏、肝脏均肿大。该种鸡场曾经使用氟苯尼考饮水7天，效果不见好转；再用进口牛制油饮水4天，同时使用新城疫IV系苗紧急接种，病情也没有好转。?

为了彻底查清该种鸡场的病原，控制本病的流行，我们采用组织病理学、病原分离与鉴定相结合的方法来诊断该病。?



1 材料与方法?



1.1 材料

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1.1.1 实验动物 34、60、80、110和160日龄的海兰褐种鸡，由大兴某种鸡场提供；10日龄的海兰褐蛋雏鸡，由大兴畜牧场提供。?



1.1.2 主要仪器 TDL5000B型低速冷冻多管离心机，上海安宁科学仪器厂；CSIII生物组织摊片烤片机，湖北省医用电子仪器厂；Leica RM2145石蜡切片机，德国Leica公司；不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器，上海博迅实业有限公司医疗设备厂。?

1.1.3 培养基 麦康凯培养基、沙保劳氏培养基和卡贝克培养基均按有关文献介绍方法配制。?



1.2 方法

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1.2.1 剖检和组织病理学检查〓现场取病鸡进行剖检，分别取其病变部位用10%甲醛液进行固定，然后再制成5 μm切片，进行H.E.染色和镀银染色。?镀银染色方法：将自然干燥的抹片，滴加溶液Ⅰ作用3～5 min，用蒸馏水进行冲洗，用溶液


Ⅱ冲去残水后，再滴加溶液Ⅱ作用30～60 s，并在酒精灯上稍稍加热。再用蒸馏水冲洗，待干燥后镜检。?



1.2.2 培养检查 用灭菌接种环取病变组织分别在沙保劳氏培养基和卡贝克培养基上进行培养，然后观察菌落的形态和其整个的生长过程中的各种变化。在培养后，取培养基上的典型菌落滴加1滴1%氢氧化钠溶液进行涂片，加上盖玻片进行镜检。?



1.2.3 动物攻毒试验 将20只10日龄的蛋雏鸡进行分组：A组8只，接种霉菌Ⅰ（来自沙保劳氏培养基培养物）；〖JP1〗B组8只，接种霉菌Ⅱ（来自卡贝克培养基培养物）；C组4只，对照组。取培养后的沙保劳氏培养基和卡贝克培养基分别用2 ml、5 ml的无菌生理盐水冲洗，用接种环将霉菌刮下配成10%溶液Ⅰ、Ⅱ，分别将溶液接种到试验组A、B。接种后，每天对鸡群进行临床观察，将死亡的鸡进行剖检记录。在30天后，将整个鸡群进行剖检，观察鸡群的整体病变。?



2 结果?



2.1 剖检变化 早期病变主要集中在肺脏，肺脏表面出现结节性坏死灶。中期病变集中在肺脏、肾脏和肠系膜，表现为肺脏出现灰白色结节样增生物，直径1～20 mm不等，有的附着在肺脏表面，有的附着于胸腔壁；肾脏肿胀，出现花斑肾；肠系膜出现白色结节样物。后期肝脏、脾脏和肾脏出现结节样增生物；腺胃乳头肿胀，个别腺胃乳头出血。?



2.2 组织病理学变化 脾脏表面出现大量的含铁血黄素沉积，静脉瘀血，部分白髓萎缩、变小，有多量的巨噬细胞和少量的嗜中性粒细胞浸润。气管内侧刷状纤毛消失，假复层柱状细胞黏膜破坏，气管环之间间隙增大，黏膜下层水肿（图4）。胰腺腺泡结构破坏，出现肉芽肿，有大量的嗜中性粒细胞和单核细胞浸润。肝小叶结构被破坏，表面有大量的嗜中性粒细胞浸润，含铁血黄素沉积，毛细血管扩张并有瘀血，肝细胞索上可见菌丝体，菌丝体伸入肝脏内部（图1）。病理早期肺脏结构基本正常，肺小叶之间有瘀血现象，中期肺脏出现肉芽肿，镀银染色可见肺脏中的霉菌菌体（图2、3）。?