传染性支气管炎(含图解)(4)

　　2.血清学试验 常用于鉴定IBV的血清学方法包括病毒中和试验（VN）和免疫荧光抗体技术（IFA）等。但由于IBV的血清型很多，而对大多数实验室来讲很难制备或获得全套的型特异性标准阳性血清。因此，目前主要通过血清学方法判断分离物中是否含有IBV。
　　3．分子生物学试验 一般根据IBV基因组RNA的保守区段（如3’末端）设计引物，通过反转录－聚合酶链式反应（RT-PCR）或反转录－巢式聚合酶链式反应（RT-nested PCR）扩增特异的基因片段。这个方法灵敏、快速、特异，能够较好地避免IBV血清型众多所造成的不便。因此已被许多实验室接受并投入临床样本检测。另外，也有通过核酸探针进行诊断的报道，但其操作不如RT-PCR方便。
　　（三）人工发病 将感染性的鸡胚尿囊液通过气管内接种或点眼感染方式，接种1日龄SPF雏鸡或无母源抗体的健康雏鸡。经18h～36h后，接种鸡会出现明显的症状和病理变化。本方法在气温较低的冬春季节进行，较易获得成功。另外，由于临床上有多种因素会影响本病的症状表现，所以建议人工发病时最好配合病理组织学检查做出诊断。
　　（四）血清学诊断 对本病的血清学检验方法有病毒中和试验（VN）、琼脂扩散试验(AGP)、血凝抑制试验(HI)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。
病毒中和试验：用病毒中和试验可对传染性支气管炎病毒进行定性和定量检验。试验方法有鸡胚（7～11日龄）法、鸡肾细胞培养法和蚀斑法3种。鸡感染传染性支气管炎病毒后约10d（疾病流行过后的恢复期），其血液内出现中和抗体，并可持续6～12个月。因此，对患病鸡群的检验，通常采双份血清样，第一次是在发病初期，第二次是在发病后2～3周。若第二次血清样抗体滴度比第一次高出4倍，即可诊断为鸡传染性支气管炎感染。
琼脂扩散试验：可用感染鸡胚的绒毛尿囊膜制备抗原，也可用聚乙二醇浓缩感染鸡胚尿囊液制备抗原，按常规方式完成试验，经24h～48h观察结果。此法特异性较强，操作方法简单而快速。鸡感染IBV野毒或接种弱毒疫苗7d～9d后就能检出沉淀抗体，并可持续2～3个月。一般认为雏鸡血清中和指数在3.17以上时，就能用琼扩试验测出沉淀抗体的存在，因此采用AGP试验对疫苗接种效果的监测有现实使用意义。
血凝抑制试验：将含有传染性支气管炎病毒的鸡胚尿囊液离心浓缩后，加等量磷脂酶C置37℃处理90min作为抗原，再按微量法操作进行血凝抑制试验。
　　（五）鉴别诊断 传染性支气管炎流行初期，要注意与新城疫、禽流感、传染性喉气管炎、支原体等引起的慢性呼吸道病、传染性鼻炎、大肠杆菌性气囊炎、雏鸡曲霉菌病及维生素A缺乏症等相区别。从临床表现上来看，新城疫和禽流感的病情往往比本病严重，雏鸡常可见到神经症状及内脏组织的出血和坏死。传染性喉气管炎很少发生于幼雏，且患鸡的呼吸道症状较重，常咳出黄色或血样黏液，气管、喉头黏膜出血和坏死严重，同时气管黏膜上皮细胞会出现合胞体和核内包涵体。慢性呼吸道病的特点是传播慢，病程长，气囊增厚并有大量干酪样物附着。其他疾病也都有各自独特的流行规律、临床症状和病理变化。当然，最可靠的还是通过病原学和血清学方法加以鉴别。
预防鸡传染性支气管炎应主要从改善饲养管理和兽医卫生条件，减少对鸡群不利应激因素，以及加强免疫接种等综合防制措施方面入手。
在免疫方面，目前国内外普遍采用Massachusetts血清型的H120和H52弱毒疫苗来控制IB，这与该型毒株流行最广泛有关。两种疫苗的区别在于前者的毒力较弱，主要用于免疫3～4周龄以内的雏鸡。因IBV变异很快，所以用疫苗前必须掌握当地流行的病毒血清型，并使用与当地流行毒株抗原性一致的疫苗品系，这样才能达到有效的免疫预防目的。
　　一般对肉鸡可在5～7日龄时通过滴鼻点眼的方式接种H120弱毒疫苗，25～30日龄时用H52弱毒苗加强免疫一次。对蛋鸡和种鸡群还应于开产前接种一次IB油乳剂灭活疫苗。本病高发地区或流行季节，也可将首免提前到1日龄，二免改在7～10日龄进行，方法同上。对于饲养周期长的鸡群最好每隔60d～90d用H52苗喷雾或饮水免疫。