肉鸡腹水症的研究进展(3)

　　细胞信号转导是指细胞感受、转导环境刺激和胞间信号的分子途径及其在生物个体发育过程中对基因表达和代谢生理反应的调控作用。生物体的细胞信号系统主要包括：腺苷酸环化酶系统、肌醇脂质信号系统、钙信号系统以及气态信号分子NO等。Rasmussen在钙受体蛋白-钙调素（又称钙调蛋白Calmodulin, CaM）的发现和功能研究的基础上提出了Ca2 第二信使学说。近年来，Ca2 信号系统已成为信号转导研究中的热点问题。这是因为Ca2 信号系统不仅调控着细胞的增殖和分化及众多生理功能，而且还是联系其他信号系统的桥梁。Ca2 信号系统的转导模式为：各种环境刺激和胞间信号通过影响Ca2 的跨膜转运，使胞内Ca2 （此处Ca2 为第二信使）浓度升高，继而与钙结合蛋白（CaM是最重要的一种）结合，然后通过Ca2 ·CaM依赖性蛋白酶调控下游信号及细胞功能。

　　AS发生发展过程的主要环节大多受Ca2 信号系统的调节，如PH形成过程中的肺动脉平滑肌收缩和肺血管平滑肌增殖，右心肥大过程中的细胞增殖以及右心衰竭过程中心肌兴奋-收缩偶联障碍等都与Ca2 信号系统有关。研究发现，在AS患鸡心肺总钙含量增加，同时胞内游离钙出现超载现象；中药川芎的有效成分川芎嗪（为较弱的钙通道阻断剂）对肉鸡肺动脉平滑肌细胞Ca2 跨膜转运有一定影响。提示钙信号可能参与了AS的发病过程。本研究将全面地研究钙信号系统与肺血管重建和右心肥大的关系，并寻找有效的钙通道阻断药物，干预AS的发病过程。为开发相应的细胞信号转导药物打下基础。

　　2.5 癌基因的表达与肺血管结构重建及右心肥大的关系

　　癌基因（Oncogene）原指细胞或病毒中存在的,能诱导正常细胞发生恶性转化的基因,由于这类基因当初从某些致癌病毒和肿瘤细胞中得到分离鉴定,并与肿瘤细胞生长、分化及调控有着极为密切的关系而得名。

　　后来研究发现，癌基因广泛存在于从低等到高等动物的细胞中,而且其结构差异很小，高度保守。其编码产物（即癌蛋白）在细胞生长、增殖、应答和功能调节中具有极其重要的作用。只是在不正常的时空条件下过度表达才诱导细胞的恶性转化，分裂失控，发生肿瘤。目前的癌基因的概念及其内涵已远远超出了当初的范围，凡是编码与细胞生长分化有关的关键性调控蛋白质（如生长因子、细胞内信息分子及转录调节因子等）的正常细胞基因都可归属于癌基因的范畴。近来，采用分子生物学的原理和方法，尤其是重组DNA技术，人们对恶性肿瘤及心血管疾病的本质有了更深刻的认识。发现两类看似不同的疾病，本质上都与细胞的增殖有关。癌基因与血管平滑肌增殖、心脏肥大关系的研究已成为分子生物学的另一热点。

　　癌基因c-jun和c-fos属于核内蛋白类癌基因，它们的编码产物为核内DNA结合蛋白，在核内的信息传递过程中起重要作用，可促进与细胞增殖有关的基因开放，从而产生细胞增殖效应。大量研究表明c-jun和c-fos在血管平滑肌及心肌细胞增殖的早期转录和表达增强（约提高5～8倍），故又称为早期反应基因。导致血管平滑肌与心肌细胞增殖的血管活性肽，如ET、AT-Ⅱ，在体内外都有极强的诱导这两种癌基因表达的作用；自由基及脂质过氧化物可直接或间接（通过释放血管活性物质）激活c-jun和c-fos，并导致细胞增殖。低氧及高脂处理大鼠，从7天开始就可观察到其肺及心肌内的c-jun和c-fos表达增强，14天时可增加6倍左右，继而发生细胞增殖。用肺动脉结扎法造成大鼠的PH，1天后即出现心肌、肺内c-jun和c-fos的大量表达，随之观察到心肌细胞、肺血管平滑肌细胞的增殖和肥大。因此，尽管目前关于心肌和血管平滑肌细胞分化、增殖机理还有待进一步研究，但c-jun和c-fos等一系列癌基因的异常表达是其重要环节。肺血管平滑肌增殖导致的肺血管结构重建以及心肌细胞肥大与增殖导致的右心肥大是AS发病过程的两个重要环节，但对其与细胞癌基因活化和表达关系的研究却较少。乔健等研究发现，低温诱导肉鸡腹水症时低温组肉鸡各段肺动脉血管平滑肌细胞c-fos和c-jun在 mRNA和蛋白表达从不同时间开始显著或极显著高于对照组，且低温处理期间，低温组肉鸡20～50µm和50～100µm肺动脉血管平滑肌细胞c-Fos蛋白表达的阳性指数与细胞增殖指数显著相关（P<0.05），各段肺动脉血管平滑肌细胞c-Jun蛋白表达的阳性指数与细胞增殖指数显著或极显著相关。结果表明环境低温诱发的肉鸡肺动脉血管平滑肌细胞c-fos和c-jun的表达参与了血管平滑肌细胞增殖的调控。通过免疫组化和原位杂交技术初步探讨c-fos 和c-jun在AS肉鸡右心肥大和衰竭过程中的变化对其表达的影响。结果发现，在22、29、36、43和50日龄时，与对照组肉鸡相比，低温组肉鸡右心室心肌细胞c-fos/c-jun蛋白和mRNA的平均光密度值显著或极显著升高（P<0.05；P<0.01），其mRNA的阳性面积百分比也极显著升高（P<0.01）。 结果表明，c-fos和c-jun癌基因在右心肥大和衰竭中起着重要作用。有理由相信，癌基因和AS相关性研究将极大加深对该病发病过程的认识，同时也为该领域的研究提供一种新思路。