应用CVI988/Rispens冷冻苗发生鸡马立克氏病免疫失败的原因分析

在目前鸡马立克氏病（MD）的免疫预防中，CVI988/Rispens冷冻活疫苗是目前全世界应用范围最广泛、免疫效果最好的疫苗。该毒株最初是由B.H.Rispens博士于1969年在荷兰的一群健康鸡群中分离所得，1972年应用该毒株制备的冷冻苗在欧洲数个国家应用，均获得极佳的保护效果[ 1, 2 ]。90年代初期开始，为解决国内HVT冻干苗免疫失败的问题，我国部分地区和鸡场开始应用该苗进行MD的免疫预防，获得较为理想的免疫效果。90年代后期至今，随着进口和国产CVI988/Rispens冷冻苗的在我国大部分地区的普及推广应用，一些地区或鸡场也开始出现了一些零星散发MD的现象。本文就笔者在近3年的时间内对国内应用该苗情况的了解，从疫苗的生产及质量标准、操作使用及养鸡环境等几个方面对出现局部免疫失败的现象作一简单分析如下：
一． 疫苗生产及质量标准
对于疫苗的生产质量问题，最重要的在于对疫苗本身的免疫效力、安全性和外源病原污染等方面的了解。其决定因素应从生产疫苗的毒种是否来源正规、符合标准，以及制苗种毒和疫苗代次的确定是否合理、疫苗效价是否保证等方面进行考虑。
1． 关于制苗种毒的来源：
最初分离的CVI988/Rispens原始毒株为一种低致病力的血清I型MDV，通过在鸭胚和鸡胚成纤维细胞培养物上交替传代致弱后，制备出生产疫苗必需的制苗种毒。荷兰中央兽医研究所（CVI）对该制苗种毒的安全性、免疫原性、外源病原污染等进行全面检测后，才发放到世界各国用于疫苗的生产。目前，欧洲绝大多数国家、日本、以色列、巴西、美国均分别从荷兰引进了共同的制苗种毒用于疫苗产业化生产，满足本国需要及大量出口。在中国，1998年首次由北京市农林科学院畜牧兽医研究所独家从荷兰引进了该制苗种毒并进行了产业化生产CVI988/Rispens冷冻苗。
由于该苗在国内的大量推广及良好应用前景，目前一些单位或个人通过各种途径从其它国家获得该毒种。但如果这些毒种来源不明或检测背景材料不清楚，疫苗的最终生产质量是一个值得考虑的因素，例如这些制苗种毒的代次是否清楚合理、种毒培育传代过程中有无污染其它外源病原（特别是一些免疫抑制性病原等）、种毒的安全性和免疫原性如何评价等。
2． 关于代次的问题：
涉及到代次问题，关键在于各厂家确定的一个既能保证毒株的毒力致弱充分、又能保证疫苗免疫原性的疫苗产品代次，主要应从CVI988/Rispens疫苗的制苗种毒代次和产品代次这两种代次进行了解和考虑。
一般来说，荷兰通过对其制备的制苗种毒进行全面检测后发放到各国的标准制苗种毒均为中等代次，如欧洲各国、日本、美国、中国引进的33～35代。在此基础上，通过生产厂家的进一步细胞传代后，最终制备的疫苗产品的代次还需要经过一系列试验研究才得以确定，一般均为40多代。但如果种毒代次不清楚，细胞传代则会盲目生产，疫苗免疫原性最终难以保证，应用这些疫苗后出现MD发病情况也将不可避免。这种情况在一些制苗种毒背景材料不清楚的厂家或个人生产的疫苗进行免疫接种后容易发生。
另外，有一些国家或厂家引进的CVI988克隆株制苗种毒（如CVI988/c株、CVI988/c/R6株），种毒代次一般在50代左右，最终的疫苗代次可高达65代，这样由于疫苗在细胞传代上过度致弱，免疫原性已大幅下降，保护效果远远不如CVI988/Rispens疫苗[ 3 ]。美国及中国的早期野外应用CVI988疫苗发生的MD免疫失败，与使用该CVI988克隆株有直接的联系。
如果使用较低代次种毒生产的疫苗，是否存在由于种毒或疫苗的代次过低，毒力致弱不充分，通过免疫鸡群的野外传播而导致病毒毒力返强最终引发MD的可能性，也是值得探讨的一个问题。
3． 关于疫苗的效价：
根据荷兰及国内本研究所的试验资料可以看到，CVI988/Rispens冷冻疫苗的效价（PFU/羽）与疫苗的保护率并不成正比关系[ 1，4 ]。试验研究表明，病毒蚀斑单位含量达到一定程度，保护率不再增加。实验室隔离饲养条件下，100PFU/羽仍可提供SPF鸡一定的保护指数（58.0），500、1000、2000和4000 PFU/羽免疫接种SPF鸡后获得的保护指数（均为79.0）并无显著差异[ 4 ]。考虑到野外早期污染及使用时的各种效价损耗，各厂家在疫苗出厂前均提高数倍以保证最终的疫苗效价在各国标准以上。但接种剂量过大，也会造成免疫麻痹或影响鸡只的生长发育。目前欧洲标准为1000 PFU/羽，美国为1500 PFU/羽，中国为3000 PFU/羽。