猪繁殖与呼吸综合征的诊断技术(中)

3、病理学变化

PRRS缺乏特征性的病理变化，感染毒株的毒力不同，其病理变化也不一样。在临床上显现期和濒死期主要表现为急性败血症。一般来说患急性PRRS的猪，肺脏呈红褐花斑状，不塌陷，感染部与健康部界线不明显，常出现在肺前腹侧；淋巴结中度到重度肿大，腹股沟淋巴结最明显；胸腔内有大量的清亮的液体。显微镜下可见弥漫性间质性肺炎并伴有嗜中性粒细胞浸润，全身性的巨噬细胞和血管内皮细胞肿大、活化或增生；广泛性的微循环障碍和非化脓性脑炎等病理变化。这些变化中，新生仔猪最明显，其次是哺乳仔猪，然后是断奶后肥育猪。

4、现代实验室检验诊断

⑴病毒的分离

病毒分离是有效诊断PRRS的方法，但对用过弱毒疫苗的猪场需要对分离物做进一步的鉴定，没有用过弱毒疫苗的猪场也有可能通过带毒精液或其他途径感染疫苗毒，而疫苗毒比强毒株更能适应细胞培养。PRRSV分离最好采集病猪的死胎或病猪的肺、脾、心、肾、脑、淋巴结、扁桃体、腹水、胸腺和骨髓匀浆制成悬液，经双抗和病毒过滤器处理后，接种猪原代肺泡巨噬细胞（PAM）或Marc145细胞。初次分离时不出现细胞病变或病变不明显，盲传几代后可出现典型的特征性病变：细胞变圆，聚集成堆，并呈灶状脱落。此外，该病毒对温度和pH很敏感，所以在样品保存和运输时要特别注意。但由于整个试验的周期长，费用高，因而不适用于临床诊断，主要用于实验室研究。

⑵抗原检测

①荧光标记单株抗体法：使用该方法可检查患猪肺、脾组织切片，检测PRRS病毒抗原所在位置。

②反转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）法：本法具有敏感、特异、快速、简便、准确等优点，已广泛用于某些RNA病毒的检测。其技术路线是：病毒培养→提纯病毒粒子→抽提病毒RNA→设计引物→RT－PCR→琼脂糖凝胶电泳→测序。目前RT－PCR已广泛应用于PRRSV的鉴定和临床诊断，可以检测血液、精液及组织样品中的病毒核酸，感染后24小时可检出病毒核酸，而血清学试验要在感染后9天左右才能检出，RT－PCR敏感性更高，还能准确反映持续性感染个体的实际带毒状态，其扩增的目的片段也主要是针对PRRSV的核衣壳蛋白基因。RT－PCR提供了一种良好的可替代细胞培养检测PRRSV的方法。利用特异性引物进行RT－PCR还可以区分不同基因型的PRRSV毒株。