(1)取病羊肺、肝、肾、淋巴结触片,经瑞氏、革兰氏染色,镜检发现2种革兰氏阳性细菌。一种菌(多量)呈球状、有明显的荚膜,多呈双球菌排列、间有4~6个的短链;另有极少量呈梭状、两端钝圆,呈单个散在分布。
(2)无菌采取病羊肺、肝、脾、肾、淋巴结、喉气管病料接种普通营养琼脂、鲜血琼脂、麦康凯琼脂平皿,置37℃培养24~48h。麦康凯琼脂上生长出一种中等大小露滴样、光滑、灰色的针尖样大小的菌落;鲜血琼脂和普通营养琼脂培养皿中生长出薄而透明、边缘呈细线状散开,形似“勋章”且易蔓延生长的薄纱状淡灰色菌落,菌落周围呈双重溶血。另一种为淡灰色、半透明、光滑、湿润、闪光、微隆、边缘整齐泛红绿色荧光、中等大小且极为黏稠的菌落,周围呈明显的β溶血。分别挑取两种不同菌落进行纯化培养,获得一致的菌落生长形态。革兰氏染色均为阳性菌。
(3)生化反应:薄纱状菌落液能使牛乳培养试管爆烈发酵,分解葡萄糖、果糖、乳糖、棉实糖、蕈糖、产酸产气;不发酵甘露醇、不分解杨苷、菊淀粉,靛基质、M.R.及V?P试验均为阴性。黏稠状菌落液能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、山梨醇、产酸不产气,不发酵菊糖、蕈糖、鼠李糖、杨苷,马尿酸钠水解和纤维素溶解试验阴性,产生H2S,不还原硝酸盐,不产生靛基质,M.R.和V-P反应阴性。
(4)将无菌采集的病料剪碎研磨后,按1∶10的比例加入生理盐水,滤过后家兔腹腔接种2ml,接种兔在24~72 h内死亡,并从病变的内脏分离出与病羊所分离的2种病菌相同
?根据以上流行病学调查、临床症状、病理变化、实验室细菌分离鉴定及动物试验,诊断为奶山羊D型魏氏梭菌和羊兽疫链球菌混合感染。?
5 药敏试验
药敏纸片24种(上海伊华医学科技有限公司产),同时按常规法自制市售兽药药敏纸片,共试验78种药品,采用纸片法检测恒温培养12~24h,两种细菌对兽药汰毒、痢星、痢敌、止痢高手(主要成分为乙酰甲喹药物等)高敏,抑菌圈直径≥30 mm?;对喘痢绝(又名悉复欢)、环丙沙星、头孢唑啉、盐酸克林霉素中敏;抑菌圈直径在15~20mm;对青霉素、氨苄 青霉素、红霉素、复合磺胺、庆大霉素、卡那霉素等60多种药物不敏感。?
6 防治